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文献速递 |《典型PCOS患者AMH检测值严重偏低全因AMH基因突变导致》

网友投稿2024-01-27 13:35:59 SEO技巧246人已围观文章来源：外链论坛

背景简述AMH（抗缪勒管激素）是属于转化生长因子β超家族的一种同源二聚体糖蛋白，由卵巢内窦前卵泡和小窦卵泡的颗粒细胞分泌AMH的成熟需要无活性的前体发生N末端Pro-region和C末端成熟结构域之间的必要切割，并通过结合AMHR2（AMH特异性2型受体）启动细胞内信号传导。hoR外链论坛

在卵巢里，AMH的主要功能是抑制始基卵泡的募集、阻碍FSH引发的小卵泡持续生长及芳香化酶的活性，同时抑制卵泡膜细胞合同的雄激素向雌激素的转化因此，理论上AMH与多囊卵巢综合征(PCOS)具有重要关联性PCOS是育龄期女性最常见的内分泌疾病之一hoR外链论坛

，其特征为：高雄激素血症、稀发/无排卵和卵巢多囊样改变 (PCOM)通常，罹患PCOS的女性由于卵巢布满了大量的小窦卵泡，卵泡内的颗粒细胞将会分泌过量的AMH，其血清AMH值将会较正常的女性高（这也为使用AMH辅助诊断PCOS奠定了理论基础）。hoR外链论坛

在一项纳入600名PCOS患者的队列研究中1.2，研究者发现有7%的患者携带了PCOS特异性的AMH及AMHR2基因突变；有3%的患者携带的AMH杂合突变与AMH体外的活性降低相关在这个队列中，这些PCOS特异性AMH突变的携带者与非携带者相比，也存在血清AMH水平降低的趋势，但未见过高的LH分泌或高雄激素血症。hoR外链论坛

此外，在另一项研究中3报告了一名PCOS患者，其月经不规律，高雄激素血症，血清AMH却低于检测限本文作者在一项体重正常的PCOS患者队列中，同样观察到了一例血清AMH值严重降低的病例，因此做了详细的分析和病例报告。hoR外链论坛

病例报告患者概况白人女性，27岁，体重正常，诊断PCOS月经紊乱，高雄激素血症，PCOM，双侧卵巢小窦卵泡计数均≥20枚；除注意力缺陷障碍外，既往史无殊；足月剖宫产1次，无并发症；阿莫西林过敏，间歇性酒精和烟草暴露史；家族史未知；查体无殊；。hoR外链论坛

AMH检测值约0.1ng/ml患者所在研究其他参与者概况该研究（P50 HD071836）由NIH（美国国立卫生研究院）支持，共纳入13名（剔除此患者后）体重正常的PCOS女性（符合1990 NIH诊断标准）及21名月经规律、雄激素水平正常、黄体期P值正常、正常排卵、无多毛、脱发、痤疮的对照组女性（19–35岁; BMI:19–25kg/m。hoR外链论坛

2）窦卵泡计数（AFC）与血样采集对照组于早卵泡期，PCOS组在闭经期通过采用4～8MHz阴道探头行经阴道超声卵巢成像，计取直径4~9mm窦卵泡数AFC值由一名研究者确认对照组女性于卵泡期采取血样；PCOS组女性于记录到的稀发／无排卵期根据血清P值决定采血时机。hoR外链论坛

禁食后血样采集并检测包括：AMH、LH、FSH、SHBG、总T、游离T、A4、DHEAS、E1、E2激素检测及结果比对血清DHEAS、A4、总T和E1通过LCMS/MS平台检测；游离T通过总T、SHBG和白蛋白的浓度计算。hoR外链论坛

血清LH、FSH和E2通过化学发光平台检测AMH检测：血清AMH值通过ELISA平台检测，检测范围为0.084–14.2ng/ml，检测下限为0.023ng/ml与对照组相比，（除去该病例外）PCOS组血清AMH水平显著性升高，且总T，游离T、A4和DHEAS水平显著性升高，伴随有LH过多分泌的趋势，且AFC值也远高于对照组。hoR外链论坛

两组间FSH、E2和E1水平接近PCOS组E2/T及E1/A4比值低于对照组，SHBG水平亦有降低趋势hoR外链论坛

与其他血清AMH值升高的PCOS患者相比，该名血清AMH值降低的PCOS患者，总T、游离T水平、FSH、E2、DHEAS、SHBG及AFC值接近；其血清A4及E1水平为PCOS组最高，LH水平组内第二高，而E2/T及E1/A4比值则相当。hoR外链论坛

基因测序由于该PCOS患者血清AMH检测值严重降低，作者怀疑其AMH基因存在多态性，于是对其及另外10名AMH检测值符合预期的PCOS患者进行了基因测序结果发现该名患者存在纯合的5号外显子单碱基替换（NG_012190.1:g.7705C>T, p.(Ala515Val)）。hoR外链论坛

其余的PCOS患者检测结果均为野生型该低AMH值患者基因型（rs10417628）的基因型频率据报道在欧洲人群中约为0.01–0.02hoR外链论坛

重组蛋白表达与活性鉴定蛋白表达将变异位点引入pcDNA3.1-hAMH表达载体同时使用含（RARR）与不含（RAQR）优化切割位点的hAMH-515Ala及hAMH-515Val质粒转染HEK293细胞。hoR外链论坛

使用稳定转染及瞬时转染两种转染方法，分别收集细胞裂解物及上清液用于后续分析Western-blot蛋白结构分析分别使用鼠单抗5/6A（识别C端成熟结构域）和2/6A（识别N端Pro-region）作为一抗，使用Alexa Fluor-800羊抗鼠单抗作为二抗。hoR外链论坛

检测后未发现两种基因型的蛋白产物加工有任何差异在细胞裂解物样本中，使用5/6A 作为一抗，hAMH-515Ala和hAMH-515Val均显示为75kD的单体前体蛋白，使用2/6A作为一抗两者均显示为150 kD的二聚体前体。hoR外链论坛

在上清液样本中，仅在含hAMH-RARR质粒的细胞系样本中可检测到AMH蛋白，反映了采用优化切割位点可改善AMH蛋白的剪切5/6A抗体检测结果显示在该体系里，hAMH-RARR-515Ala和hAMH-RARR-515Val样本均发生了完全切割，2/6A抗体检测结果显示存在两条条带，猜测可能是蛋白pro-region存在二次切割的位点。hoR外链论坛

生物活性分析使用经western-blot分析确认过的可正确表达AMH的质粒与AMH-反应性 BRE-Luc报告质粒共转染宿主，通过细胞荧光素酶试验进行验证检测结果显示重组hAMH-515Val蛋白与野生型的重组hAMH-515Ala蛋白活性无差异。hoR外链论坛

免疫活性分析使用同一款ELISA试剂盒检测稳定转染细胞株的细胞裂解物及上清液，作者发现，相较野生型hAMH-515Ala，引入hAMH-515Val变异的质粒的细胞株，其细胞裂解物AMH低于检测下限，上清液中仅能检测到极低水平的AMH值。hoR外链论坛

该结果与优化裂解位点的存在与否无关使用另一品牌的自动化检测平台及另一种抗体，在不同基因型蛋白的上清中，AMH检测值极为接近考虑与抗体不同的结合表位有关hoR外链论坛

小结与讨论hoR外链论坛

截止本文发表，共有18种PCOS特异性的AMH杂合突变被发现。有研究提示，其中的17种突变显示出体外活性降低及小鼠模型中的Leydig MA-10细胞转录抑制受损２。hoR外链论坛

本文报道的5号外显子rs10417628纯和突变，出现在一位体重正常的PCOS患者中经体外重组蛋白实验证明，其蛋白加工及体外活性与野生型蛋白无明显差异，这也解释了该患者与其他体重正常的PCOS患者症状相似的原因。hoR外链论坛

但无论是该患者的血清样本或者是重组蛋白样本在使用某一种AMH检测试剂盒检测时，都显示出了严重的AMH检测值降低；在调换其他检测抗体后，此问题得到了解决考虑是由于不同的抗体与AMH蛋白结合的表位不同导致的。hoR外链论坛

综上所述，当有典型的PCSO患者出现AMH检测值低于检测限或者严重降低时，在排除检测平台的因素后，应考虑AMH基因的多态性，并更换其他检测平台再次进行检测。hoR外链论坛

参考文献(上下滑动查看)：[1]. Gorsic LK, Dapas M, Legro RS, Hayes MG, Urbanek M. Functional genetic variation in the anti-Mullerian hormone pathway in women with polycystic ovary syndrome. J Clin Endocrinol Metab 2019;104: 2855–2874.hoR外链论坛

[2]. Gorsic LK, Kosova G, Werstein B, Sisk R, Legro RS, Hayes MG, Teixeira JM, Dunaif A, Urbanek M. Pathogenic anti-Mullerian hormone variants in polycystic ovary syndrome. J Clin Endocrinol Metab 2017;102:2862–2872.hoR外链论坛

[3]. Grbavac I, Zec I, Ljiljak D, Rakos Justament R, Bukovec Megla Z,Kuna K. Undetectable serum levels of anti-Mullerian hormone in　women with ovarian hyperstimulation syndrome during in vitro fertilization　and successful pregnancy outcome: case report. Acta ClinhoR外链论坛

Croat 2018;57: 177–180.hoR外链论坛