多囊卵巢综合征女性IVF助孕中同型半胱氨酸水平与卵子质量关系的研究

 

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摘    要：目的 探讨接受体外受精助孕的多囊卵巢综合征 (polycystic ovary syndrome, PCOS) 女性患者的卵泡液同型半胱氨酸 (homocysteine, Hcy) 浓度与卵子及胚胎质量的关系。Azj外链论坛

方法 收集77对准备行IVF助孕夫妇的女性患者的取卵日卵泡液及月经周期第3天的血液标本其中45例患者为PCOS, 32例患者为输卵管因素, 并且男方精液检测均在正常范围采用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 测定血清与卵泡液中Hcy的浓度;分析卵泡液、血清Hcy浓度与卵母细胞及胚胎参数之间的关系。Azj外链论坛

结果 PCOS组患者血清及卵泡液Hcy浓度显著高于输卵管因素组;PCOS组患者MⅡ卵率、正常受精率及优质胚胎率均显著低于输卵管因素组;在PCOS组, 按照卵泡液Hcy浓度不同将患者分成三组, MⅡ卵和MⅠ卵之间卵泡液Hcy浓度存在显著差异 (P<0.001) , 不同组间正常受精率存在显著差异 (P<0.001) , 1级和2级胚胎的卵泡液Hcy浓度显著低于3级胚胎 (P<0.001) 。Azj外链论坛

结论 卵泡液Hcy浓度可能对准备接受IVF助孕的PCOS女性的卵子成熟度、正常受精率及胚胎质量有一定影响。关键词：卵泡液;多囊卵巢综合征;同型半胱氨酸;体外受精;Azj外链论坛

多囊卵巢综合征 (PCOS) 是育龄女性常见的内分泌及代谢异常疾病, 其患者在体外受精 (IVF) 诊疗过程中虽有较高的获卵率, 但累计妊娠率不高同型半胱氨酸 (Hcy) 是人体内蛋氨酸和半胱氨酸代谢的重要中间产物, 在很多研究中, PCOS患者的血清Hcy浓度都表现出升高趋势[1,2,3]。Azj外链论坛

而且一些研究发现Hcy的浓度升高, 生育力会受到一定程度的影响[4,5], 胚胎质量评分较低, 并且增加出生缺陷的风险[6,7]本研究旨在探讨PCOS患者IVF过程中Hcy对卵子质量和妊娠结局的影响1 资料和方法Azj外链论坛

1.1 一般资料2015年10月—2016年5月在我院准备接受体外受精-胚胎移植 (IVF-ET) 助孕 (第1周期) 的45对夫妇为女方患有PCOS、男方精液正常, 32对夫妇为女方输卵管因素、男方精液正常, 纳入本次研究。Azj外链论坛

PCOS患者的诊断标准采用2003年鹿特丹标准;同时, 收集以上患者月经周期第3天的血清及取卵日当天的卵泡液所有患者均接受标准的长方案治疗根据Istanbul共识对卵母细胞成熟度以及卵裂期胚胎质量进行分级。Azj外链论坛

1.2 方法Azj外链论坛

1.2.1 IVF基本流程和标本制备月经第21天 (P-COS患者长期未来月经, 先用黄体酮撤退出血, 见血的第21天) , 给予短效GnRH-a (天兴, 成都天山台制药有限公司) 降调节, 根据患者监测指标给予Gn (丽申宝, 丽珠集团丽珠制药厂) 启动量, 当至少有3个优势卵泡直接达20mm, 参考激素水平停用促排卵药和GnRHa, 当晚肌注r-HCG (艾泽, 雪兰诺欧洲公司) 250μg, 注射后36 h, 阴道超声下取卵。Azj外链论坛

取卵过程中, 取出直径大于14mm的成熟卵泡, 并将每位患者的第一管卵泡液单独收集待测, 保证没有血液及其他污染将卵泡液置于ZONKIA LC-180离心机, 以2 500r/min离心10min, 去除红细胞、白细胞及颗粒细胞等成分。Azj外链论坛

分装标记后存放于-70℃冰箱待统一测定同日收集患者空腹静脉血清保存待测取卵后72 h进行胚胎移植移植后14d测血HCG, 血HCG>10 IU/L, 确定为着床成功;移植后28d或以后行超声检查确定是否临床妊娠。Azj外链论坛

1.2.2 标本的检测Hcy浓度的测定均使用北京百奥莱博酶联免疫吸附试验 (ELISA) 试剂盒, 批内误差<9%, 批间误差小于15%;抗缪勒氏管激素 (AMH) 测定采用广州市康润生物科技有限公司的ELISA试剂盒, 批内误差<10%, 批间误差<15%;促卵泡生成素 (FSH) 测定使用西门子公司的化学发光法试剂盒, 批内误差<10%, 批间误差<15%。Azj外链论坛

1.2.3 统计学分析采用SPSS 15.0软件进行数据处理。分别对相应数据进行卡方检验、t检验、非参数检验。检验水准α=0.05。2 结果Azj外链论坛

2.1 二组患者基本情况比较在接受IVF助孕的77对夫妇中, 按女方因素分组的二组患者的基本情况的比较见表1, 二组患者卵子质量及胚胎参数的比较见表2PCOS组患者的平均体质指数显著高于输卵管因素组患者的体质指数 (P<0.05) , 见表1;PCOS组患者的血清、卵泡液Hcy浓度显著高于输卵管因素组患者的血清、卵泡液Hcy浓度 (P<0.01) , 见表2;同时, PCOS组和输卵管因素组的成熟卵 (MⅡ卵) 率存在显著差异 (P<0.01) , 见表3、受精率和优胚率均存在差异 (P<0.05) , 见表3。Azj外链论坛

2.2 PCOS组患者根据卵泡液Hcy浓度分组的基本情况的比较将PCOS组患者卵泡液Hcy浓度按照百分位数分组, 其中第25%, 50%, 75%的百分位数卵泡液Hcy浓度分别为6.8μmol/L、7.9μmol/L、8.9μmol/L, <6.8μmol/L为低浓度组, ≥6.8μmol/L且<8.96μmol/L为中浓度组, ≥8.9μmol/L的为高浓度组。Azj外链论坛

高、中、低浓度组的平均年龄、BMI、AMH、FSH、获卵数、MⅡ卵数和受精卵数均未见显著差异, 见表4表1 接受IVF助孕的77对夫妇中女方患者基本情况的比较Azj外链论坛

注:AMH、FSH为月经周期第3天检测表2 二组患者血清、卵泡液Hcy浓度的比较Azj外链论坛

2.3 PCOS组患者根据卵泡液Hcy浓度分组的卵子质量及胚胎参数的比较卵泡液Hcy不同浓度组之间, MⅡ卵率和MI卵率都存在显著差异 (P<0.01) , 正常受精率存在显著差异 (P<0.01) , 1~2级胚胎和3~4级胚胎比例存在显著差异 (P<0.01) , 见表5。Azj外链论坛

表3 二组患者卵子质量及胚胎参数的比较 Azj外链论坛

注:MⅡ卵率=MⅡ卵数/总获卵数, 正常受精率=2PN受精卵数/总获卵数, 优胚率=优质胚胎数/总胚胎数表4 PCOS组患者根据卵泡液Hcy浓度分组的基本情况的比较Azj外链论坛

注:AMH、FSH为月经周期第3天检测表5 PCOS组患者根据卵泡液Hcy浓度分组的卵子质量及胚胎参数的比较 Azj外链论坛

注:MⅡ卵率=MⅡ卵数/总获卵数, 正常受精率=2PN受精卵数/MⅡ卵数3 讨论Azj外链论坛

PCOS是育龄女性常见的内分泌异常疾病, 患者达到全部育龄女性人群的5%~10%[8], 其临床表现主要包括月经紊乱、高雄激素血症及卵巢多囊样改变, 部分患者伴有血浆Hcy水平增高[9,10]P-COS是无排卵性不孕的常见原因, 患者促排卵治疗中妊娠率低、流产率高等问题在IVF助孕中仍然存在。Azj外链论坛

其获卵率虽然通常较高, 但是累积妊娠率却明显低于非PCOS患者[8], 这可能与患者整体Hcy水平和卵母细胞局部微环境中的Hcy水平异常相关[11]Hcy是含硫氨基酸蛋氨酸和半胱氨酸代谢的中间产物, 其合成和分解保持平衡。Azj外链论坛

关键酶的活性异常会导致Hcy的代谢障碍, 从而出现高Hcy血症[12]近些年Hcy代谢对生育力方面影响的研究逐渐引起广泛重视[7,13]本研究纳入77对接受IVF助孕夫妇的女性患者, 检测其月经周期第3天血清Hcy与取卵日卵泡液中Hcy的浓度, 并分析其与卵子、胚胎等的相关参数的关系。Azj外链论坛

研究发现, PCOS组患者血清及卵泡液Hcy浓度显著高于对照组;PCOS组患者按照卵泡液Hcy浓度不同将患者分组, MⅡ卵和MⅠ卵之间卵泡液Hcy浓度存在显著差异 (P<0.05) , 1级和2级胚胎的卵泡液Hcy浓度显著低于3级胚胎。Azj外链论坛

因此推断Hcy对女性生育力可能存在一定的影响本研究发现, PCOS组患者血清及卵泡液Hcy浓度显著高于输卵管因素组正常人体内Hcy的代谢保持动态平衡, 涉及多个酶和中间产物, 因此引起Hcy水平异常的原因是多方面的。Azj外链论坛

Palep-Singh等[14,15]发现PCOS患者体内存在MTHFR667的TT基因型并与体内Hcy水平的升高相关, 发现MTR2756的AA基因型与PCOS女性Hcy水平的升高密切相关PCOS的重要病理生理特征为高雄激素血症、高胰岛素血症和/或胰岛素抵抗 (IR) 。Azj外链论坛

目前普遍接受在心血管疾病的发病中, 胰岛素抵抗导致高同型半胱氨酸血症Schachter等[2]认为PCOS患者胰岛素抵抗造成的高胰岛素血症可能抑制肝脏合成胱硫醚β合成酶, 进而导致Hcy代谢障碍总之, 虽然PCOS患者体内Hcy升高的原因尚未完全明确, 但是PCOS患者体内Hcy升高的现象已经逐渐被认可并引起重视。Azj外链论坛

Hcy可以通过主动运输通过细胞膜, 因此作为卵子所处微环境的卵泡液, 其Hcy浓度与血清中Hcy浓度密切相关本次研究中发现, MⅡ卵和MⅠ卵之间卵泡液Hcy浓度存在显著差异 (P<0.01) 同时, Hcy高浓度和低浓度的卵泡液的卵子受精率存在显著差异 (P<0.01) , 说明卵泡液Hcy浓度在卵子发育和受精过程中发挥重要作用。Azj外链论坛

同时, 在接受IVF助孕的PCOS患者其卵泡液Hcy水平反应了患者卵子受精的潜能这可能是由于卵泡局部微环境中高浓度Hcy的直接细胞毒性:内膜的损伤, 氧化应激物质 (ROS) 的过度产生, 转甲基作用受到抑制, 基因的异常表达[16]和间接毒性:活性氧 (ROS) 的过氧化作用导致卵母细胞质量和发育潜能受损伤[11]。Azj外链论坛

卵泡液作为卵子生长发育的微环境, 卵泡液中包括很多物质、酶和激素来保证卵子正常代谢和功能, 某些物质浓度过低或过高都会对卵子发育产生一定的影响[17]因此, 我们可以推断出卵泡液高浓度的Hcy可能导致许多卵子发育缺陷, 可能阻碍受精或影响助孕的结局。Azj外链论坛

本研究发现不同Hcy水平组的胚胎质量差异显著其中, 3级胚胎的卵泡液Hcy浓度显著高于1~2级胚胎的卵泡液Hcy的浓度, 说明在接受IVF助孕PCOS患者, 卵泡液Hcy浓度与胚胎质量存在直接关系我们的发现与Ebish[18]和Berker[19]的研究报道一致。Azj外链论坛

PCOS患者高浓度的Hcy一方面抑制甲基化和RNA、DNA合成而对胚胎有直接毒性作用, 另一方面使胎盘血管化不良, 从而降低胚胎着床率, 升高流产率[20]本研究还存在一些局限性问题首先, 本次研究纳入的病例数比较少, 容易使结果产生偏倚。Azj外链论坛

其次, 由于卵泡液中蛋白质的含量比较高, 从而增加了标本的检测难度;同时卵泡液中容易混入血液, 引起误差的概率比较大本研究认为, 接受IVF助孕的PCOS患者卵泡液Hcy浓度的增高可能会影响卵子及胚胎质量。Azj外链论坛

然而, Boxmeer在接受IVF助孕患者的两次研究中却得出了相反的结论[5,21]Boxmeer[5]认为, 由于两次研究测定的Hcy浓度水平接近, 可能是样本量较小导致Hcy作为一种硫醇诱导释放的ROS对卵子成熟和受精过程非常重要, 即卵泡液中某个生理剂量的ROS对卵泡成熟[22]和排卵[23]是必须的。Azj外链论坛

而且, 先前的一些研究显示经过IVF助孕成功的女性卵泡液ROS显著高于未成功的女性[24,25]因此, 卵泡液Hcy的浓度可能反映出卵子所处的微环境, 进一步可以推断出卵泡液Hcy有可能是在某范围内发挥正常的生理作用, 过高或过低的浓度都有可能对卵子质量乃至妊娠结局产生不利影响。Azj外链论坛

因此, 未来的研究应该探索适宜的卵泡液Hcy的浓度范围区间, 以利于判断IVF的妊娠结局在未来的研究中, 不仅应改进本次研究的局限性带来的问题, 而且应该更加注重机制的研究, 进一步明确Hcy对女性生育力的影响。Azj外链论坛

SrcDatabase-来源库: 期刊Title-题名: 多囊卵巢综合征女性IVF助孕中同型半胱氨酸水平与卵子质量关系的研究Author-作者: 安萍;韩宝生;樊桂玲;赵铭佳;罗萌萌;Organ-单位: 河北省唐山市妇幼保健院;Azj外链论坛

Source-文献来源: 中国煤炭工业医学杂志Azj外链论坛

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